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定制羊駝免疫納米抗體

發布時間:2018-03-20 點擊量:2199

在羊駝外周血液中存在一種天然缺失輕鏈的抗體,該抗體只包含一個重鏈可變區(VHH)和兩個常規的CH2與CH3區,但卻不像人工改造的單鏈抗體片段(scFv)那樣容易相互沾粘,甚至聚集成塊。更重要的是單獨克隆并表達出來的VHH結構具有與原重鏈抗體相當的結構穩定性以及與抗原的結合活性,是目前已知的可結合目標抗原的極小單位。VHH晶體為2.5nm,長4nm,分子量只有15KDa,此也被稱作納米抗體(Nanobody,Nb)。

VHH可溶性極高,不易聚集,能耐高溫、強酸、強堿等致變性條件,適合于原核表達和各種真核表達系統,廣泛用于開發治療性抗體藥物、診斷試劑、親和純化基質和科學研究等領域。

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傳統抗體、重鏈抗體、VHH

納米抗體諸多方面均優于傳統抗體。基于羊駝重鏈抗體的VHH單域抗體的特殊結構,兼具了傳統抗體與小分子藥物的優勢,幾乎克服了傳統抗體的開發周期長,穩定性較低,保存條件苛刻等缺陷,逐漸成為新一代治療性生物醫藥與臨床診斷試劑中的新興力量。相比于常規抗體,納米抗體的優勢有:

1.分子量小,可穿透血腦屏障;

2.原核或真核系統中高表達;

3.特異性強,親和力高;

4.對人的免疫原性弱。

納米抗體文庫構建與固相淘選技術路線如下:

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納米抗體文庫構建與淘選示意圖

噬菌體展示技術的優點

噬菌體展示技術(Phage Display)是一種基因表達產物和親和選擇相結合的技術,以改造的噬菌體為載體,把待選基因段定向插入噬菌體外殼蛋白質基因區,使外源多肽表達展示噬菌體表面,進而通過親和富集法表達多肽或蛋白質的噬菌體。

噬菌體展示技術作為一種新興的高通量篩選技術,在基因工程抗體的制備、疾病診斷和治療以及蛋白質間相互作用等研究領域已經廣泛應用,如:

1、隨機肽庫,抗體庫、蛋白質突變體庫的構建;

2、模擬抗原表位的篩選(Screening)等。

服務技術方案:

1、制備免疫原(客戶提供抗原)。

2、免疫羊駝。通過4-5次免疫,使羊駝產生較強的免疫應答。

3、分離淋巴細胞。通過mRNA的分離、反轉錄,得到羊駝重鏈抗體基因。

4、構建納米抗體文庫。將羊駝重鏈抗體基因克隆至噬菌粒載體,轉化宿主菌,構建納米抗體文庫。

5、親和淘選。液相篩選或固相篩選等多種方式,進行親和篩選,篩選高親和力納米抗體。

6、原核表達駝源納米抗體。采用原核表達系統,制備可溶性納米抗體。

7、抗體活性分析和特異性鑒定。


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